MN9D小鼠中腦多巴胺能神經(jīng)元細胞培養操作步驟
更新時(shí)間:2022-05-07 點(diǎn)擊次數:975
MN9D小鼠中腦多巴胺能神經(jīng)元細胞別名:MN9D細胞,小鼠中腦多巴胺能神經(jīng)元細胞,培養環(huán)境:空氣,95%; 二氧化碳 (CO2),5%。
細胞培養操作步驟:
1.吸走多余培養基,加入3-5mL PBS后輕輕晃動(dòng)培養瓶潤洗細胞;
2.吸干凈PBS后
加入1mL 0.25%胰-酶-0.53mM EDTA,輕輕搖晃培養皿使胰-酶浸沒(méi)細胞表面,培養瓶放37度培養箱消化;
(細胞對于消化比較敏感,消化過(guò)度會(huì )嚴重影響細胞狀態(tài),導致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長(cháng)。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落,可以輕輕吹下時(shí)即可終止,禁止消化到細胞*漂浮?;靹蚣毎麜r(shí)盡量輕柔,不要吹出大量氣泡。)
3.加入6-8ml*培養基終止消化,輕輕吹下細胞混勻;
4.將混勻的細胞1000rpm(約150g)離心3min,棄上清,再用新鮮培養基重懸37度培養箱繼續培養;
傳代比例: 不同細胞生長(cháng)速度不一,具體傳代比例視細胞生長(cháng)速度而定,大部分細胞適用1:3-1:4傳代,生長(cháng)較慢的細胞可以1:2傳代。
注意事項:不同品牌胰-酶消化時(shí)間差別較大,注意嚴格控制消化時(shí)間消化傳代細胞時(shí)吹打細胞注意盡量輕柔,不要產(chǎn)生過(guò)多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。