植物類(lèi)黃酮(Flavonoid)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法100管/96樣
注 意:正式測定之前選擇2-3個(gè)預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
類(lèi)黃酮是一類(lèi)多苯化合物,屬于植物次生代謝物,對人體具有消炎,抗菌,降血脂,清除體內羥自由基,預防癌癥等作用。
測定原理:
在堿性亞硝酸鹽溶液中,類(lèi)黃酮與鋁離子形成在510nm處有特征吸收峰的紅色絡(luò )合物,測定樣品提取液在510nm處的吸光值,即可計算樣品類(lèi)黃酮含量。
自備實(shí)驗用品及儀器:
天平、烘箱、粉碎儀、篩子、超聲破碎儀、60%乙醇、離心機、可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:60%乙醇,自備。
試劑一:液體1mL×1管,4℃保存。
試劑二:液體1mL×1管,4℃保存。
試劑三:液體10mL×1瓶,4℃保存。
類(lèi)黃酮提?。?/span>
將樣本烘干至恒重,粉碎,過(guò)40目篩之后,稱(chēng)取約0.02g,加入2mL提取液,60℃振蕩提取2h,10000g,25℃,離心10min,取上清待測。
測定操作表:
1、 分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長(cháng)至510nm,蒸餾水調零。
2、 操作表
空白管 | 測定管 | |
樣本待測液(µL) | 108 | |
蒸餾水(µL) | 108 | |
試劑一(µL) | 6 | 6 |
混勻,25℃靜置6min | ||
試劑二(µL) | 6 | 6 |
混勻,25℃靜置6min | ||
試劑三(µL) | 80 | 80 |
混勻,25℃靜置15 min,測定510nm處吸光值。ΔA=A測定-A空白,空白管只要做一管。 |
類(lèi)黃酮含量計算公式:
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線(xiàn):y = 5.02x+0.0007,R2 = 0.9996
類(lèi)黃酮含量(mg/g 干重)=(ΔA -0.0007)÷5.02÷(W÷V樣總)= 0.398×(ΔA -0.0007)÷W
V樣總:加入提取液體積,2.5mL; V樣:反應中樣品體積,0.108mL; W:樣品質(zhì)量,g
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線(xiàn):y = 2.51x+0.0007,R2 = 0.9996
類(lèi)黃酮含量(mg/g 干重)=(ΔA -0.0007)÷2.51÷(W÷V樣總)= 0.797×(ΔA -0.0007)÷W
V樣總:加入提取液體積,2mL;V樣:反應中樣品體積,0.108mL;W:樣品質(zhì)量,g
Z低檢出限為10µg/g。
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